Kako se proteini sisara izoluju i pročišćavaju u laboratoriji?

Hej, kolege entuzijasti nauke! Kao dobavljač proteina sisara, jako sam oduševljen da podijelim detalje o tome kako izolujemo i pročistimo ove nevjerovatne molekule upravo ovdje u laboratoriji. To je divlja vožnja, puna cool tehnika i zapanjujuće nauke. Dakle, uronimo!

Razumijevanje proteina sisara

Pre svega, proteini sisara su prilično posebni. Oni igraju ključnu ulogu u svim vrstama bioloških procesa u našim tijelima, od kontrakcije mišića do imunološkog odgovora. Ovi proteini se mogu naći u različitim izvorima sisara poput mlijeka, krvi i tkiva. I kao dobavljač, stalno smo u potrazi za najboljim načinima da se dočepamo čistih, visokokvalitetnih proteina sisara koje možemo ponuditi našim kupcima.

Izvori proteina sisara

Izvori koje koristimo su različiti. Na primjer, mlijeko je zlatni rudnik. Kravlje mlijeko je poznato po svom sadržaju proteina, ali i kamilje mlijeko postaje sve popularnije. Pogledajte našeKina kamilje mlijeko u prahu sušeno punomasno mlijeko bez ikakvih aromaiPuna krema punomasno mlijeko u prahu, instant rastvorljivo za konditorske i mliječne proizvode. Ovo su sjajni izvori proteina sisara. Takođe se bavimoKina veleprodaja kamiljeg mlijeka u prahu Sirova kamilja - mlijeko - prah, koji je sirovina bogata jedinstvenim proteinima.

Izolacija proteina sisara

Priprema uzorka

Proces izolacije počinje pripremom uzorka. Kada dobijemo uzorak, recimo mlijeko, prvo se moramo uvjeriti da je u ispravnom stanju. Filtrirat ćemo ga kako bismo se riješili velikih čestica poput masnih kuglica ili krhotina. Ovaj korak je ključan jer ako ne očistimo uzorak, može upropastiti kasnije korake pročišćavanja.

Liza ćelija (ako je iz ćelija ili tkiva)

Ako su naš izvor ćelije ili tkiva, moramo ih razbiti kako bismo oslobodili proteine. Ovo se zove liza ćelija. Postoji nekoliko načina da to učinite. Jedna uobičajena metoda je korištenje deterdženata. Deterdženti mogu razbiti ćelijske membrane, omogućavajući proteinima da se izliju u rastvor. Drugi način je mehanička liza, poput upotrebe homogenizatora. To je kao da zaista grubo protresete ćelije kako biste ih otvorili.

Centrifugiranje

Nakon lize koristimo centrifugiranje. Ovo je poput super brzog ciklusa centrifuge. Stavili smo naš uzorak u centrifugu i on se vrti pri stvarno velikim brzinama. Teži dijelovi uzorka, poput staničnih ostataka i organela, tonu na dno, formirajući kuglicu. Proteini ostaju u tečnom dijelu, koji se naziva supernatant. Pažljivo sakupljamo supernatant jer su tu naši dragocjeni proteini.

Pročišćavanje proteina sisara

hromatografija

Kromatografija je jedna od najvažnijih tehnika pročišćavanja koje koristimo. Postoje različite vrste, ali počnimo s ionsko-izmjenjivačkom hromatografijom. Proteini imaju različite naboje ovisno o sastavu aminokiselina. U ionsko-izmjenjivačkoj hromatografiji koristimo kolonu ispunjenu smolom koja ima specifičan naboj. Ako naši proteini imaju naboj suprotan naboju smole, zalijepit će se za njega. Zatim možemo promijeniti uvjete, kao što je koncentracija soli, kako bi se proteini odlijepili i izašli iz kolone jedan po jedan.

Druga vrsta je kromatografija veličine. Kao što ime govori, ova metoda razdvaja proteine ​​na osnovu njihove veličine. Stupac je ispunjen sitnim perlicama koje imaju pore različitih veličina. Manji proteini mogu biti zarobljeni unutar pora, dok veći proteini samo brže prolaze kroz kolonu. Na ovaj način možemo odvojiti proteine ​​prema njihovoj molekularnoj težini.

Afinitetna hromatografija

Afinitetna hromatografija je super. Koristi prednosti specifičnih interakcija između proteina i drugih molekula. Na primjer, ako naš protein ima specifičnog partnera za vezivanje, možemo pričvrstiti tog partnera na smolu u koloni. Kada naš uzorak prođe kroz kolonu, ciljni protein će se vezati za svog partnera na smoli, dok će drugi proteini proći kroz kolonu. Zatim možemo koristiti specijalnu otopinu da razbijemo vezivanje i dobijemo naš pročišćeni protein.

Ultrafiltracija

Ultrafiltracija je još jedan zgodan alat. Pomalo je kao super - fino sito. Koristimo membranu sa specifičnim veličinama pora. Mali molekuli i voda mogu proći kroz membranu, ali naši proteini, koji su veći, ostaju iza. To nam pomaže da koncentrišemo našu otopinu proteina i također se riješimo svih malih nečistoća.

Kontrola kvaliteta

Jednom kada izolujemo i pročistimo naše proteine ​​sisara, ne šaljemo ih odmah. Imamo strogi proces kontrole kvaliteta. Koristimo tehnike poput SDS - PAGE (elektroforeza natrijum dodecil sulfata - poliakrilamidnog gela) da provjerimo čistoću naših proteina. To je kao trka za proteinima. Stavljamo naše uzorke proteina u gel, a zatim primjenjujemo električnu struju. Proteini će se kretati kroz gel na osnovu njihove veličine. Ako vidimo jednu traku, to znači da je naš protein prilično čist.

Također koristimo masenu spektrometriju kako bismo precizno odredili molekularnu težinu naših proteina. Ovo nam pomaže da budemo sigurni da imamo pravi protein i da nije degradiran ili modifikovan tokom procesa izolacije i pročišćavanja.

Zašto su naši izolovani i pročišćeni proteini sisara važni

Proteini koje isporučujemo koriste se u širokom spektru primjena. U farmaceutskoj industriji mogu se koristiti za razvoj novih lijekova. Na primjer, neki proteini mogu djelovati kao antitijela za borbu protiv bolesti. U prehrambenoj industriji, proteini sisara se koriste za poboljšanje nutritivne vrijednosti i teksture prehrambenih proizvoda.

A pošto koristimo tako rigorozne tehnike izolacije i pročišćavanja, naši kupci mogu biti sigurni da dobijaju visokokvalitetne, čiste proteine ​​sisara. Bilo da ste istraživač u laboratoriji ili proizvođač hrane koji traži najbolje sastojke, naši proizvodi su odličan izbor.

Povežimo se za nabavku

Ako ste zainteresirani za naše proteine ​​sisara i želite započeti raspravu o nabavci, ne ustručavajte se kontaktirati! Uvijek smo željni rada s novim kupcima i pomoći vam da pronađete savršene proteinske proizvode za vaše potrebe. Bilo da se radi o istraživanju, proizvodnji hrane ili bilo kojoj drugoj primjeni, mi ćemo vas pokriti.

Reference

• Lodish, H., Berk, A., Kaiser, CA, Krieger, M., Scott, MP, Bretscher, A.,... & Matsudaira, P. (2008). Molecular Cell Biology. WH Freeman.
• Deutscher, MP (Ed.). (1990). Vodič za pročišćavanje proteina. Academic Press.